之前的文章中介紹過心肌分化試劑盒的凍存方法，本文再給大家說說心肌分化試劑盒的復(fù)蘇和維持。

　　心肌分化試劑盒的復(fù)蘇方法：

　　1. 37℃水浴預(yù)熱心肌接種培養(yǎng)基，取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量心肌接種培養(yǎng)基，置于5% CO2的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

　　2. 37℃解凍細(xì)胞，快速搖晃使細(xì)胞融化至僅剩一小塊冰晶(避免凍存管蓋接觸水面)，迅速取出并用70%酒精消毒凍存管外表面。

　　3. 用1ml移液器小心的將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的50ml離心管，避免劇烈吹吸。

　　4. 用1ml 心肌接種培養(yǎng)基潤洗凍存管，以收集剩余細(xì)胞。然后逐滴加入含有細(xì)胞懸液的50ml離心管，由于zui初滴加的稀釋比例較大，應(yīng)維持在5秒1滴(50uL)的較慢速率，2分鐘左右滴加完此1ml培養(yǎng)基，滴加過程中不斷輕搖混勻。

　　5. 以每秒1滴的速率，逐滴加入4ml 心肌接種培養(yǎng)基，滴加過程中不斷輕搖混勻。200g離心5分鐘。

　　6. 用心肌接種培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，輕柔吹打混勻，并接種到準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿/瓶中，水平十字振動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

　　7. 5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，更換為心肌維持培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)。

　　心肌分化試劑盒的維持：

　　1. 37℃水浴預(yù)熱心肌維持培養(yǎng)基。

　　2. 獲得的心肌細(xì)胞用心肌維持培養(yǎng)基培養(yǎng)，每48小時(shí)換液一次;或者加入標(biāo)準(zhǔn)量150%的維持培養(yǎng)基，每72小時(shí)換液一次。

　　3. 細(xì)胞在4周內(nèi)性狀穩(wěn)定。如果需要長期培養(yǎng)，為了維持細(xì)胞穩(wěn)定性和純度，需要定期采用心肌純化*培養(yǎng)基進(jìn)行處理，一般每4-6周處理一次，每次持續(xù)3-4天。