產品名稱：Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒
產品貨號：MJ5460 （ 50 rxn）、MJ5461 （20 rxn）、MJ5462（6 rxn）
產品簡介
InspireSpark©PrimeRNP Kit試劑盒（貨號：MJ5460）是一款基于自遞送 CRISPR/SpCas9系統的基因編輯工具，專為基因敲除（KO）和基因敲入（KI）實驗優(yōu)化設計。通過創(chuàng)新的遞送機制，無需依賴電轉儀等復雜設備即可在原代細胞及各類細胞系中實現高效編輯，經嚴格驗證，基因敲除、基因敲入效率達 85-90%，同時保持極低脫靶率及無細胞毒性特性，為研究者提供安全可靠的實驗解決方案。
儲存條件與有效期
短期儲存：解凍后保存于-20℃冰箱，避免反復凍融。
長期儲存：未開封試劑盒保存于-80℃冰箱。開封后如長期不使用保存于-80℃冰箱 。
有效期：18個月
實驗步驟
以人原代T細胞（1x106個細胞）為例.
一. 轉導復合物制備
1.取1.5μL SgRNA（100μM）與1.5μL Solution I 于1.5mL（DNase-Free、RNase-Free）離心管中混合，37℃孵育5-10分鐘，形成RNP復合物。
注： 先加SgRNA再加Solution I
2. 加入50μL預平衡至室溫的Solution II（使用前渦旋混勻），充分混勻后室溫靜置5分鐘
二. 細胞轉導
1. 預處理細胞：激活1x106個T細胞48小時后，以300xg離心洗滌并轉移至新培養(yǎng)板，次日進行編輯操作。
2. 離心收集細胞，徹·底移除培養(yǎng)基（建議使用OptiMEM或PBS清洗殘留）。 3. 將細胞沉淀重懸于制備好的轉導復合物溶液中，輕柔混勻后，37℃孵育45分鐘。
三. 細胞培養(yǎng)與效率檢測
1. 向轉導后的細胞混合液中加入600μL含10% FBS及200U IL-2的T細胞培養(yǎng)基，重懸后接
種至24孔板，維持細胞密度為2-3×10?/mL。
2. 37℃培養(yǎng)4-5天后，檢測基因編輯效率。
注意事項與擴展應用
1. AAV輔助敲入（KI）：若需聯合 AAV（MOI: 2×10?-5×10?）進行KI，按以下操作：
AAV體積 ≤ 5μL時：于步驟一（RNP制備階段）加入。
AAV體積＞5μL時：于步驟三（細胞培養(yǎng)階段）加入。
2. 慢病毒輔助實驗：激活24小時后感染，72小時進行編輯轉導。
3. 多基因編輯：
- 方案A：步驟一中混合多靶點RNP復合物。
- 方案B：在不同時間點分步轉導不同RNP復合物。
4. 細胞狀態(tài)要求：轉導前需確保細胞活性＞90%，編輯效率與細胞狀態(tài)直接相關。
5. 電轉兼容性：Solution I 中的eSpCas9蛋白可單獨用于電轉，效率較野生型提升30%。
貼壁細胞需消化離心后按上述步驟操作。
6. 本實驗需使用DNase-Free、RNase-Free耗材。
產品名稱：Inspire Spark©PrimeRNP Kit基因編輯試劑盒
產品貨號：MJ5460 （ 50 rxn）、MJ5461 （20 rxn）、MJ5462（6 rxn）
常見問題：
InspireSpark® PrimeRNP Kit Q&A
Q：T細胞激活48小時后離心清洗的清洗液及鋪板培養(yǎng)基要求？
A：清洗液為實驗原用的T細胞培養(yǎng)基。操作流程：輕柔吹吸重懸細胞 → 離心（400 ×g, 5
min）→ 徹·底棄上清 → 用新鮮配制的同款T細胞培養(yǎng)基重懸細胞。目的：防止T細胞過度激 活、去除碎片、優(yōu)化細胞狀態(tài)。
Q：實驗步驟中FBS能否替換為其他添加劑？
A：可使用人AB血清或無血清培養(yǎng)基（注：無血清條件下細胞生長狀態(tài)可能減弱）。
Q：轉導培養(yǎng)基含IL-2或血清替代物是否影響轉導？
A：無影響。通過離心清洗徹·底棄除上清（避免血清蛋白干擾），最終使用轉導復合物重懸 細胞沉淀即可。
Q：同時編輯兩個基因是否需要配置兩份混合液？能否同時加入細胞？
A：僅需將RNP1與RNP2加入同一份Solution II中孵育，無需分裝多份Solution II?；旌虾蟮?/span>
復合物可同時加入細胞。
Q：敲除（KO）和敲入（KI）能否同時實現？最多支持幾個基因編輯？
A：支持同步操作。多基因編輯需在制備轉導復合物時進行多RNP制備，或分次轉導（建議
：首·次轉導≤2個基因，間隔48小時后再轉導≤2個基因）。 Q：Solution II能否搭配其他廠家的Cas9蛋白？是否支持電轉
A：可以使用，但未經大量數據驗證，無法保證其編輯效率。
紅榮微再 基因編輯：精準基因編輯方案，突破電轉瓶頸 · 原代細胞高效編輯 · 85-90% KO/KI效率
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